微生物定量檢驗(yàn)一般都涉及菌落計(jì)數(shù)。對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理時(shí)通常需要使用統(tǒng)計(jì)的方法。由于菌落計(jì)數(shù)服從泊松分布，因此釆用泊松分布的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理優(yōu)于釆用正態(tài)分布的統(tǒng)計(jì)方法。檢驗(yàn)者往往習(xí)慣采用正態(tài)分布的統(tǒng)計(jì)方法，因此也可以通過對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換或加1后開方的方法將原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布數(shù)據(jù)后再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩種統(tǒng)計(jì)方法都適用于微生物數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。
1.準(zhǔn)確度
微生物定量檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度是指替代方法的檢驗(yàn)結(jié)果與藥典方法檢驗(yàn)結(jié)果一致的程度。準(zhǔn)確度的確認(rèn)應(yīng)在檢測(cè)的范圍內(nèi)，通常用微生物的回收率（%）來表示。
檢測(cè)范圍內(nèi)的準(zhǔn)確度都應(yīng)符合要求，準(zhǔn)確度驗(yàn)證的方法是：制備試驗(yàn)菌的菌懸液，菌懸液的濃度應(yīng)選擇為能夠準(zhǔn)確計(jì)數(shù)的最高濃度，然后系列稀釋至較低濃度（如小于10cfu/ml）。例如，菌落計(jì)數(shù)平皿法的替代方法，在制備高濃度菌懸液時(shí)，其濃度可以是103cfu/ml，并系列稀釋至100cfu/ml。每個(gè)試驗(yàn)菌應(yīng)至少選擇5個(gè)菌濃度進(jìn)行準(zhǔn)確度確認(rèn)，替代方法的檢驗(yàn)結(jié)果不得少于藥典方法檢驗(yàn)結(jié)果的70%，也可以采用合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法表明替代方法的回收率至少與藥典方法一致。當(dāng)替代方法的回收率高于藥典方法時(shí)，有必要結(jié)合專屬性項(xiàng)下的有關(guān)內(nèi)容對(duì)準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
2.精密度
微生物定量檢驗(yàn)的精密度是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，對(duì)同一個(gè)均勻的樣品多次重復(fù)取樣測(cè)定，其檢驗(yàn)結(jié)果的一致程度，通常采用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差來表示，也可以采用其他適宜的方式。
精密度驗(yàn)證的方法是：制備試驗(yàn)菌的菌懸液，菌懸液的濃度應(yīng)選擇為能夠準(zhǔn)確讀數(shù)的最高濃度，然后系列稀釋至較低濃度（如小于10cfu/ml）。每個(gè)試驗(yàn)菌選擇其中至少5個(gè)濃度的菌懸液進(jìn)行檢驗(yàn)。每一個(gè)濃度至少應(yīng)進(jìn)行10次重復(fù)檢驗(yàn)，以便能夠采用統(tǒng)計(jì)分析方法得到標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。一般情況下，可以接受的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于35%。不考慮特殊的檢驗(yàn)結(jié)果，替代方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于藥典方法。
3.專屬性
微生物定量檢驗(yàn)的專屬性是指通過檢測(cè)適宜的試驗(yàn)菌，以證明檢驗(yàn)方法與其設(shè)定目的相適應(yīng)的能力。例如，菌落計(jì)數(shù)平皿法其設(shè)定目的在于檢出一定數(shù)量的微生物，則其專屬性驗(yàn)證應(yīng)證明當(dāng)樣品中存在一定數(shù)量的試驗(yàn)菌時(shí)，通過平皿法檢驗(yàn)，能夠檢出試驗(yàn)菌，而樣品的存在不會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響。專屬性驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)能夠設(shè)計(jì)出可能使替代方法出現(xiàn)假陽性的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛠硖魬?zhàn)替代方法，從而確認(rèn)替代方法的適用性。當(dāng)替代方法不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁就可以定量時(shí)（如不需要增菌或在1～50cfu范圍內(nèi)就可直接測(cè)定菌數(shù)的定量方法），以上驗(yàn)證方式就顯得更為重要。
4.定量限
微生物定量檢驗(yàn)的定量限是指樣品中能被準(zhǔn)確定量測(cè)定的微生物最di數(shù)量。由于無法得到含有已知微生物數(shù)量的實(shí)驗(yàn)樣品，因此，在定量限驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)選擇在檢驗(yàn)范圍內(nèi)至少5個(gè)菌濃度，每個(gè)濃度重復(fù)取樣測(cè)定不少于5次，替代方法的定量限不得大于藥典方法。需要注意的是，由于細(xì)菌計(jì)數(shù)和菌落數(shù)服從泊松分布，可能存在計(jì)數(shù)結(jié)果的誤差，因此替代方法的定量限僅需證實(shí)在相近的低限度下其靈敏度至少相當(dāng)于藥典方法。
定量限驗(yàn)證的方法是：在檢驗(yàn)范圍的低限制備5份不同含菌濃度的菌懸液，每份菌懸液分別用藥典方法和替代方法進(jìn)行不少于5次檢驗(yàn)，采用統(tǒng)計(jì)方法比較替代方法的檢驗(yàn)結(jié)果與藥典方法結(jié)果的差異，從而評(píng)價(jià)替代方法的定量限。
5.線性
微生物定量檢驗(yàn)的線性是指在一定范圍內(nèi)，檢驗(yàn)結(jié)果與樣品中微生物數(shù)量成比例關(guān)系的程度。線性驗(yàn)證時(shí)必須覆蓋能夠準(zhǔn)確測(cè)定的所有濃度范圍。每株試驗(yàn)菌應(yīng)選擇至少5個(gè)濃度，每個(gè)濃度至少測(cè)定5次。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以檢驗(yàn)結(jié)果為因變量，以樣品中微生物的預(yù)期數(shù)量為自變量進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r。當(dāng)相關(guān)系數(shù)不能準(zhǔn)確評(píng)估線性時(shí)，只能確定簡(jiǎn)單大約的關(guān)系值。替代方法的相關(guān)系數(shù)不得低于0.95。
6.范圍
微生物定量檢驗(yàn)的范圍是指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，檢驗(yàn)方法適用的高低限濃度或數(shù)量的區(qū)間。
7.重現(xiàn)性
微生物定量檢驗(yàn)的重現(xiàn)性是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)人員、儀器、試劑的批次等）發(fā)生變化時(shí)，所得檢驗(yàn)結(jié)果的精密度。重現(xiàn)性可視為微生物檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力。方法使用者應(yīng)優(yōu)先測(cè)定該驗(yàn)證參數(shù)。在樣品中接種一定數(shù)量的試驗(yàn)菌（接種量應(yīng)在定量限以上），采用藥典方法和替代方法，分別由不同人員，在不同時(shí)間，使用不同的試劑（或儀器）進(jìn)行檢驗(yàn)，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來評(píng)價(jià)兩種方法的重現(xiàn)性差異。驗(yàn)證過程中，應(yīng)關(guān)注樣品的一致性。
8.耐用性
微生物定量檢驗(yàn)的耐用性是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時(shí)的可靠性提供依據(jù)。方法使用者應(yīng)優(yōu)先測(cè)定該驗(yàn)證參數(shù)。與藥典方法比較，若替代方法檢驗(yàn)條件較為苛刻，則應(yīng)在方法中加以說明。替代方法與藥典方法的耐用性比較不是必須的，但應(yīng)單獨(dú)對(duì)替代方法的耐用性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以便使用者了解方法的關(guān)鍵操作點(diǎn)。
